correspondência cruzada
o procedimento de correspondência cruzada determina se o sangue do Dador é compatível (ou incompatível) com o sangue do receptor. Uma variante deste teste é o teste de crossmatch ou de incompatibilidade de égua-foal ou égua-garanhão.em relação às transfusões sanguíneas, deve efectuar-se uma correspondência cruzada nas seguintes situações: estão presentes anticorpos patogénicos naturais dos antigénios do grupo sanguíneo estranho. Isto ocorre no gato., Nesta espécie, deve efectuar-se uma correspondência cruzada na primeira e em todas as transfusões, a menos que sejam conhecidos os tipos de sangue do dador e do receptor. Nas raças de gatos em que existe uma baixa percentagem de gatos do tipo B (por exemplo, siameses, DSH ou DLH nos EUA), a transfusão de sangue de um dador não cruzado ou não identificado pode ser realizada de forma relativamente segura. No entanto, há ainda uma (ainda que pequena) possibilidade de uma grande reacção transfusional e este procedimento não é recomendado.sensibilização de um animal a antigénios dos glóbulos vermelhos estranhos, numa espécie sem anticorpos naturais., Esta é a situação no cão e no cavalo, resultando na produção de anticorpos adquiridos. Nestas espécies, um cruzamento não precisa ser realizado na primeira transfusão que o animal recebe (desde que você possa ter certeza de que esta é a primeira transfusão de sempre), mas deve ser realizado em transfusões subsequentes (se o intervalo entre a primeira e as transfusões subsequentes for superior a 5 dias).,
a correspondência cruzada irá detectar incompatibilidades entre o dador e o receptor que não serão evidentes na tipagem de sangue (uma vez que a tipagem de sangue não está disponível para cada grupo sanguíneo, apenas para os principais). Além disso, o procedimento de cruzamento não detectará anticorpos de título baixo e, portanto, não impedirá reacções de transfusão hemolítica de tipo retardado (para mais informações, ver reacções adversas).
Existem dois tipos de cruzamentos:
- maior cruzamento: este é o mais importante cruzamento, comparando os eritrócitos dadores com o soro receptor (i.e., está a verificar se há anticorpos pré-formados (adquiridos ou de ocorrência natural) no soro receptor contra os eritrócitos dadores. Para o crossmatch principal, você precisa de glóbulos vermelhos do doador (este pode ser sangue inteiro de um animal doador ou embalado de glóbulos vermelhos) em EDTA ou citrato e soro do receptor (tubo não-anticoagulante).
- menor correspondência cruzada: isto compara o soro dador aos eritrócitos receptores e verifica se existem anticorpos pré-formados no soro dador que possam hemolizar os glóbulos vermelhos do receptor., Esta correspondência cruzada é menos importante, uma vez que, normalmente, o soro do Dador é significativamente diluído após transfusão e é improvável que produza uma reacção Transfusional significativa. Este tipo de cruzamento pode ser importante se a transfusão de pequenos pacientes, em que a hemodiluição é menos provável de ocorrer. No procedimento de cruzamento, os eritrócitos lavados são incubados com soro. Para cavalos, ruminantes e camelídeos, uma fonte de complemento (para hemolizar os eritrócitos) é adicionada, como os anticorpos nos cavalos são geralmente hemolisinas que requerem uma fonte de complemento para sua ação hemolítica.,
- Para A maior correspondência cruzada: os eritrócitos dadores são lavados e incubados com soro receptor.
- para a menor correspondência cruzada: o soro Dador é incubado com eritrócitos receptores lavados.
a mistura de eritrócitos e soro é então observada visualmente para hemólise (especialmente no cavalo), e microscopicamente para aglutinação. Qualquer evidência de aglutinação ou hemólise indica um cruzamento incompatível. Existem também kits comerciais disponíveis para detectar incompatibilidades do grupo sanguíneo., Muitos deles são baseados em géis, aos quais se adicionam células vermelhas do sangue do doador e soro do receptor (Crossmatch principal) ou soro do doador e células vermelhas do sangue do receptor (Crossmatch menor). Reações positivas (crossmatches incompatíveis) produzem uma linha de glóbulos vermelhos no meio do gel, enquanto em uma reação negativa (Compatível), os sedimentos de glóbulos vermelhos para o fundo do tubo., Estudos têm mostrado que estes métodos rápidos baseados em gel não são tão sensíveis quanto testes laboratoriais mais demorados que avaliam para aglutininas microscopicamente (ou hemolisinas visualmente para algumas espécies) e os resultados nem sempre estão correlacionados entre os testes (Guzman et al 2016).quando há uma forte reacção incompatível no cruzamento principal, o sangue do dador não deve ser transfundido em circunstância alguma. Quando há uma reacção incompatível no cruzamento menor, a transfusão pode prosseguir., No entanto, se for provável que o soro doado contribua substancialmente para o volume plasmático do receptor, o soro deve ser removido do sangue total do dador. As células embaladas (lavadas ou não lavadas) devem ser reconstituídas em solução salina isotónica estéril antes da perfusão. Note – se que, se o sangue incompatível com a combinação cruzada for administrado a cavalos adultos na primeira transfusão, os glóbulos vermelhos transfundidos terão uma sobrevivência consideravelmente reduzida e podem ser observadas reacções ligeiras não hemolíticas (Tomlinson et al 2015). Como consequência, os investigadores recomendam cruzar os cavalos na primeira transfusão.,estão disponíveis mais informações sobre os testes cruzados oferecidos pelo Centro de diagnóstico da Saúde Animal da Universidade Cornell.
Mare-potro ou mare-garanhão incompatibilidade de teste
O mare-potro ou mare-garanhão incompatibilidade de teste é um cross-match procedimento que procura incompatibilidade entre a égua e o potro ou a égua e do garanhão. Especificamente, o teste compara se existem anticorpos no soro de égua (ou colostro) aos eritrócitos de potro ou de garanhão., A compatibilidade cruzada mare-foal é um teste para a confirmação ou prevenção da isoeritrolise neonatal.a isoeritrólise Neonatal (NI) é uma anemia hemolítica que ocorre em potros (que herdam os antigénios do grupo sanguíneo do seu senhor) nascidos de éguas de um tipo sanguíneo diferente do garanhão para o qual foram acasalados., A égua é sensibilizada ao antigénio do grupo sanguíneo do garanhão através de: gravidez anterior (situação mais frequente) transfusões anteriores de sangue ou plasma a vacinação com produtos contendo antigénios dos eritrócitos equinos ocorre durante a gravidez devido a um fenómeno chamado hemorragia retroplacental, no qual o sangue do potro entra em contacto com a circulação do égua durante as últimas semanas de gravidez. Pode ocorrer naturalmente mais cedo se houver alguma patologia placentária., Portanto, NI ocorre geralmente em éguas multipares e apenas depois do potro ter ingerido colostro. Os tipos de sangue mais comuns no cavalo que produzem NI são os antigénios Aa e Qa, embora tenha sido reportado NI a outros antigénios (incluindo Pa e Ua). Quando o potro ingere colostro contendo anticorpos da égua contra os antigénios dos glóbulos vermelhos do sire, o potro (se o tipo sanguíneo do sire foi herdado) sofre uma anemia hemolítica, que pode ser grave e resultar em mortalidade neonatal., A maioria dos sinais de NI ocorrem dentro de 24 a 36 horas; fraqueza, hemoglobinúria e hemoglobinemia podem ser vistos em casos graves.além disso, todos os cavalos carecem de um antigénio único dos glóbulos vermelhos do burro (o chamado factor burro). Assim, as gravidezes de mulas estão em risco de iniciar NI (MacLeay, 2001, Boyle et al., 2005).
teste de incompatibilidade de Égua-foal
para determinar se NI ocorreu em um potro que já nasceu, uma correspondência cruzada pode ser realizada no égua e potro. Isto requer a submissão de eritrócitos do potro (sangue EDTA) e o soro separado do égua., Na Universidade Cornell, nós realizamos um teste de incompatibilidade mare-foal e procuramos tanto aglutinação (avaliação microscópica) e reações hemolíticas (esta última através da adição de uma fonte de complemento para lyse os glóbulos vermelhos).
alternativamente, para diagnosticar NI em um potro, um teste de Coombs direto (procurando por anticorpos ou complemento ligado aos glóbulos vermelhos do potro) pode ser feito no sangue do potro (isso requer um tubo EDTA do potro). No entanto, estes testes são geralmente realizados por laboratórios de referência e os resultados só podem estar disponíveis após vários dias.,
Existe um kit disponível, chamado teste de aglutinação do potro da icterícia (JFA), que pode ser realizado “stallside” (se você tiver uma centrifugadora). Este teste avalia a aglutinação entre colostro ou soro de égua e sangue de potro. O colostro ou o soro é diluído em série e misturado com sangue de potros em tubos de ensaio. Centrifugam-se os tubos e observa-se o botão para a aglutinação. Se a aglutinação estiver presente, o botão não se dispersa quando o tubo é piscado., Uma reacção positiva com um título de > 1:16 é indicativa de uma incompatibilidade (com títulos inferiores podem ocorrer reacções falsas-positivas) e indica que o colostro deve ser retido do potro. Este é um teste útil para determinar se um égua, que já teve um potro com NI e foi acasalado com o mesmo garanhão que produziu o potro NI ou outro garanhão de tipo sanguíneo desconhecido, tem anticorpos contra o potro atual., No entanto, o teste não procura hemólise e é menos sensível do que o procedimento de cruzamento de rotina (que avalia a aglutinação microscópica e hemólise)., serum alloantibody bound to foal RBCs
Mare: venous blood (non-anticoagulant)
Mare: colostrum/serum
Aglutinação
Mare-garanhão incompatibilidade de teste
Neonatal isoerythrolysis pode potencialmente ser prevenida através do teste de uma suscetíveis mare antes de parturição (mare-garanhão incompatibilidade de teste) e a retenção de colostro por 24 a 48 horas (por muzzling o potro e a alimentação de uma fonte alternativa de colostro)., Idealmente, a égua deve ser cruzada com o garanhão (eritrócitos de garanhão e soro de égua), especialmente nas últimas 1-3 semanas de gravidez, quando é provável que ocorra exposição aos eritrócitos do potro (se houver incompatibilidade, a égua terá uma resposta anamnéstica ao antigénio, resultando num título elevado de anticorpos neste momento). Alguns autores recomendam repetir cross-matching a cada duas semanas, no último mês de gravidez, para olhar para um aumento da titulação (muitas vezes aumenta a partir de < 1:4 a >1:256 nas últimas quatro semanas antes do parto)., Um título crescente indica uma alta probabilidade de NI e revela a necessidade de reter o colostro do potro.em alternativa, o teste de aglutinação do potro da icterícia pode ser utilizado no parto e o colostro pode ser suspenso. Note – se que uma única correspondência cruzada entre uma égua e um garanhão pode não revelar uma incompatibilidade se a égua for testada antes ou no início da gravidez (devido a títulos baixos de anticorpos que podem não produzir uma reacção incompatível)., Desde o mare-garanhão incompatibilidade teste exige que as células vermelhas do sangue do garanhão (EDTA sangue), que pode ser difícil de obter, uma abordagem alternativa para determinar se o mare é provável que vai desenvolver anticorpos contra o potro células vermelhas do sangue (com o touro do tipo de sangue), o mare serum pode ser blindado contra um painel de antígenos de glóbulos vermelhos para a presença de anticorpos, o que é feito em centros específicos (ver links relacionados)., Mais uma vez, este teste deve ser feito o mais próximo possível de focagem, quando é provável que a égua desenvolva uma resposta anamnéstica (uma resposta aumentada após re-exposição ao antigénio primário dos glóbulos vermelhos) a partir do tipo incompatível de glóbulos vermelhos no sangue do potro (ver acima). Quando um égua tem um potro NI e é acasalado novamente para o mesmo garanhão, há uma chance de 50% do próximo potro estar em risco de NI (se herdar o tipo de glóbulos vermelhos do Senhor). Neste caso, é sempre mais seguro reter o colostro do potro., Se a égua for acasalada com um novo garanhão, digitar tanto a égua quanto o garanhão é ideal para determinar se eles têm tipos de sangue incompatíveis. Na verdade, uma vez que uma égua tenha tido um potro com NI, é sempre bom determinar o tipo sanguíneo da égua e o provável antigénio ofensivo para que os futuros acasalamentos possam ser adequadamente geridos. A única vantagem que uma correspondência cruzada tem contra a abordagem específica do título de anticorpos é que pode detectar incompatibilidades do grupo sanguíneo contra antigénios que não estão num painel de rastreio., No entanto, existe um baixo risco de se omitir um anticorpo anti-RBC, uma vez que o soro é testado contra os antigénios eritrocitários agressivos comuns e que são raros os relatos de outros antigénios associados ao NI. Ambos os testes (títulos de correspondência cruzada e de anticorpos) têm potencial para a perda de níveis baixos de anticorpos. É por isso que é essencial testar a égua o mais perto possível de foaling.