Corrispondenza incrociata

La procedura di corrispondenza incrociata determina se il sangue del donatore è compatibile (o incompatibile) con il sangue del ricevente. Una variante di questo test è il test crossmatch o incompatibilità cavalla-puledro o cavalla-stallone.

In relazione alle trasfusioni di sangue, deve essere eseguita una corrispondenza incrociata nelle seguenti situazioni:

• Sono presenti anticorpi patogeni naturali contro antigeni del gruppo sanguigno estraneo. Questo si verifica nel gatto., In questa specie, deve essere eseguita una corrispondenza incrociata sulla prima e su ogni trasfusione, a meno che non siano noti i tipi di sangue sia del donatore che del ricevente. Nelle razze di gatti in cui vi è una bassa percentuale di gatti di tipo B (ad esempio siamesi, DSH o DLH negli Stati Uniti), la trasfusione di sangue da un donatore non incrociato o non tipizzato può essere eseguita in modo relativamente sicuro. Tuttavia, c’è ancora una (anche se piccola) possibilità di una reazione trasfusionale importante e questa procedura non è raccomandata.
• Sensibilizzazione di un animale ad antigeni estranei degli eritrociti, in una specie senza anticorpi presenti in natura., Questa è la situazione nel cane e nel cavallo, con conseguente produzione di anticorpi acquisiti. In queste specie, una corrispondenza incrociata non deve essere eseguita alla prima trasfusione che l’animale riceve (purché si possa essere sicuri che questa sia la prima trasfusione in assoluto), ma deve essere eseguita alle trasfusioni successive (se l’intervallo tra la prima e la successiva trasfusione è superiore a 5 giorni).,

Il cross-matching rileverà incompatibilità tra donatore e ricevente che non saranno evidenti sulla tipizzazione del sangue (poiché la tipizzazione del sangue non è disponibile contro tutti i gruppi sanguigni, solo quelli principali). Inoltre, la procedura di cross-match non raccoglierà anticorpi a basso titolo e quindi non preverrà reazioni trasfusionali emolitiche di tipo ritardato (per ulteriori informazioni, vedere reazioni avverse).

Esistono due tipi di cross-match:

1. Major cross-match: Questo è il cross-match più importante, confrontando gli eritrociti del donatore con il siero del ricevente (cioè, sta controllando la presenza di anticorpi preformati (acquisiti o presenti in natura) nel siero ricevente contro gli eritrociti donatori. Per il crossmatch principale, è necessario globuli rossi dal donatore (questo può essere sangue intero da un animale donatore o globuli rossi confezionati) in EDTA o citrato e siero dal ricevente (tubo non anticoagulante).
2. Corrispondenza incrociata minore: questo confronta il siero del donatore con gli eritrociti del ricevente e controlla la presenza di anticorpi preformati nel siero del donatore che potrebbero emolizzare i globuli rossi del ricevente., Questa corrispondenza incrociata è meno importante poiché di solito il siero del donatore è marcatamente diluito dopo la trasfusione ed è improbabile che produca una reazione trasfusionale significativa. Questo tipo di cross-match potrebbe essere importante se la trasfusione di piccoli pazienti, in cui emodiluizione è meno probabile che si verifichi. Nella procedura di corrispondenza incrociata, gli eritrociti lavati vengono incubati con siero. Per cavalli, ruminanti e camelidi, viene aggiunta una fonte di complemento (per emolizzare gli eritrociti), poiché gli anticorpi nei cavalli sono solitamente emolisine che richiedono una fonte di complemento per la loro azione emolitica.,

• Per il cross-match principale: gli eritrociti donatori vengono lavati e incubati con siero ricevente.
• Per la corrispondenza incrociata minore: il siero del donatore viene incubato con eritrociti riceventi lavati.

La miscela di eritrociti e siero viene quindi osservata visivamente per l’emolisi (specialmente nel cavallo) e microscopicamente per l’agglutinazione. Qualsiasi evidenza di agglutinazione o emolisi indica una corrispondenza incrociata incompatibile. Ci sono anche kit commerciali disponibili per rilevare incompatibilità gruppo sanguigno., Molti di questi sono basati su gel, a cui vengono aggiunti i globuli rossi del donatore e il siero del ricevente (crossmatch maggiore) o il siero del donatore e i globuli rossi del ricevente (crossmatch minore). Le reazioni positive (incroci incompatibili) producono una linea di globuli rossi nel mezzo del gel, mentre in una reazione negativa (compatibile), i globuli rossi si depositano sul fondo del tubo., Gli studi hanno dimostrato che questi metodi rapidi a base di gel non sono così sensibili come i test di laboratorio più dispendiosi in termini di tempo che valutano le agglutinine al microscopio (o le emolisine visivamente per alcune specie) e i risultati non sempre sono correlati tra i test (Guzman et al 2016).

Quando c’è una forte reazione incompatibile sulla corrispondenza incrociata maggiore, il sangue del donatore non deve essere trasfuso in nessuna circostanza. Quando c’è una reazione incompatibile sulla corrispondenza incrociata minore, la trasfusione può andare avanti., Tuttavia, se è probabile che il siero donato contribuisca sostanzialmente al volume plasmatico del ricevente, il siero deve essere rimosso dal sangue intero del donatore. Le cellule imballate (lavate o non lavate) devono essere ricostituite in soluzione salina isotonica sterile prima dell’infusione. Si noti che se il sangue incompatibile con la corrispondenza incrociata viene somministrato a cavalli adulti alla prima trasfusione, i globuli rossi trasfusi avranno una sopravvivenza marcatamente ridotta e si possono osservare lievi reazioni non emolitiche (Tomlinson et al 2015). Di conseguenza, i ricercatori raccomandano di incrociare i cavalli alla prima trasfusione.,

Ulteriori informazioni sono disponibili sui test cross-match offerti dal Centro diagnostico per la salute degli animali della Cornell University.

Test di incompatibilità cavalla-puledro o cavalla-stallone

Il test di incompatibilità cavalla-puledro o cavalla-stallone è una procedura incrociata che cerca l’incompatibilità tra la cavalla e il puledro o la cavalla e lo stallone. In particolare, il test confronta se ci sono anticorpi nel siero di mare (o colostro) agli eritrociti di puledro o stallone., Il cross-match di incompatibilità tra cavalla e puledro è un test per la conferma o la prevenzione dell’isoeritrolisi neonatale.

L’isoeritrolisi neonatale (NI) è un’anemia emolitica che si verifica nei puledri (che ereditano gli antigeni del gruppo sanguigno del loro padre) nati da giumente di un gruppo sanguigno diverso dallo stallone a cui sono stati accoppiati., Il mare è sensibilizzato per il sangue di gruppo antigene dello stallone attraverso:

• gravidanze precedenti (la situazione più comune)
• precedenti trasfusioni di sangue o plasma
• la vaccinazione con prodotti contenenti equina degli eritrociti antigeni

Sensibilizzazione si verifica durante la gravidanza a causa di un fenomeno chiamato retroplacental sanguinamento, in cui il puledro sangue viene a contatto con il mare, la circolazione durante le ultime settimane di gravidanza. Può verificarsi naturalmente prima se c’è qualche patologia placentare., Pertanto, NI si verifica di solito nelle cavalle multipare e solo dopo che il puledro ha ingerito il colostro. I gruppi sanguigni più comuni nel cavallo che producono NI sono antigeni Aa e Qa, sebbene sia stato riportato NI ad altri antigeni (inclusi Pa e Ua). Quando il puledro ingerisce colostro contenente anticorpi della cavalla contro gli antigeni dei globuli rossi del sire, il puledro (se il gruppo sanguigno del sire è stato ereditato) soffre di anemia emolitica, che può essere grave e causare mortalità neonatale., La maggior parte dei segni di NI si verificano entro 24-36 ore; debolezza, emoglobinuria ed emoglobinemia possono essere osservati nei casi più gravi.

Inoltre, tutti i cavalli mancano di un antigene che è unico per i globuli rossi dell’asino (il cosiddetto fattore asino). Pertanto, le gravidanze di mulo sono a rischio di iniziare NI (MacLeay, 2001, Boyle et al., 2005).

Test di incompatibilità cavalla-puledro

Per determinare se si è verificato NI in un puledro già nato, è possibile eseguire una corrispondenza incrociata sulla cavalla e sul puledro. Ciò richiede la presentazione di eritrociti dal puledro (sangue EDTA) e siero separato dalla cavalla., Alla Cornell University, eseguiamo un test di incompatibilità cavalla-puledro e cerchiamo sia l’agglutinazione (valutazione microscopica) che le reazioni emolitiche (quest’ultima tramite l’aggiunta di una fonte di complemento per lisare i globuli rossi).

In alternativa, per diagnosticare NI in un puledro, un test diretto di Coombs (alla ricerca di anticorpi o complemento legato ai globuli rossi del puledro) può essere fatto sul sangue del puledro (questo richiede una provetta EDTA dal puledro). Tuttavia, questi test vengono solitamente eseguiti dai laboratori di riferimento e i risultati possono essere disponibili solo dopo diversi giorni.,

È disponibile un kit, chiamato test di agglutinazione del puledro ittero (JFA), che può essere eseguito “stallside” (se si dispone di una centrifuga). Questo test valuta l’agglutinazione tra colostro o siero di mare e sangue di puledro. Il colostro o il siero viene diluito in serie e miscelato con sangue puledro in provette. I tubi vengono centrifugati e il pulsante viene osservato per l’agglutinazione. Se è presente agglutinazione, il pulsante non si disperde quando il tubo viene premuto., Una reazione positiva a un titolo di > 1: 16 è indicativa di un’incompatibilità (a titoli inferiori possono verificarsi reazioni falsi positivi) e indica che il colostro deve essere trattenuto dal puledro. Questo è un test utile per determinare se una cavalla, che ha precedentemente avuto un puledro con NI ed è stata accoppiata allo stesso stallone che ha prodotto il puledro NI o un altro stallone di gruppo sanguigno sconosciuto, ha anticorpi contro il puledro corrente., Tuttavia, il test non cerca l’emolisi ed è meno sensibile della procedura di routine cross-match (che valuta l’agglutinazione microscopica e l’emolisi)., serum alloantibody bound to foal RBCs

Alloantibody from mare colostrum/serum on foal RBCs Samples Foal: venous blood (EDTA) Foal: venous blood (EDTA and non-anticoagulant)
Mare: venous blood (non-anticoagulant) Foal: venous blood (EDTA)
Mare: colostrum/serum Procedure Washed foal RBCs are incubated with the equine polyvalent Coombs reagent (anti-IgG, anti-IgM and anti-C antibodies) at 37° C., Le diluizioni possono essere eseguite. I globuli rossi di puledro lavati vengono incubati a 37°C con siero di mare e miscelati con complemento esogeno. Vengono eseguite due diluizioni (1:4 e 1: 16).,sult Agglutinazione Emolisi a diluizioni >1:16
Agglutinazione Agglutinazione in diluizioni 1:16 o superiore

Mare-stallone incompatibilità test

isoeritrolisi Neonatale, potenzialmente, può essere impedito da test sensibili mare prima del parto (mare-stallone incompatibilità test) e la ritenuta di colostro per 24 a 48 ore (per imbavagliare il puledro e l’alimentazione di una fonte alternativa di colostro)., Idealmente, la cavalla deve essere incrociata con lo stallone (globuli rossi dello stallone e siero della cavalla), specialmente nelle ultime 1-3 settimane di gravidanza quando è probabile che si verifichi l’esposizione agli eritrociti del puledro (se c’è un’incompatibilità, la cavalla avrà una risposta anamnestica all’antigene, con conseguente alto titolo anticorpale in questo momento). Alcuni autori raccomandano di ripetere cross-matching ogni due settimane nell’ultimo mese di gravidanza per cercare un aumento titolo (spesso aumenta da < 1:4 >1:256 nelle ultime quattro settimane prima foaling)., Un titolo crescente indica un’alta probabilità di NI e rivela la necessità di trattenere il colostro dal puledro.

In alternativa, il test di agglutinazione del puledro ittero può essere utilizzato al parto e il colostro può essere sospeso. Si noti che una singola corrispondenza incrociata tra una cavalla e uno stallone potrebbe non rivelare un’incompatibilità se la cavalla viene testata prima o all’inizio della gravidanza (a causa di bassi titoli anticorpali che potrebbero non produrre una reazione incompatibile)., Poiché il test di incompatibilità cavalla-stallone richiede globuli rossi dallo stallone (sangue EDTA), che può essere difficile da ottenere, un approccio alternativo per determinare se la cavalla è probabile che svilupperà anticorpi contro i globuli rossi puledro (con il gruppo sanguigno del padre), il siero della cavalla può essere proiettato contro un pannello di antigeni RBC per la presenza di anticorpi, che viene fatto in centri specifici (vedi link correlati)., Anche in questo caso, questo test deve essere eseguito il più vicino possibile al parto, quando è probabile che la cavalla sviluppi una risposta anamnestica (una risposta aumentata dopo la riesposizione all’antigene primario dei globuli rossi) dal tipo di globuli rossi incompatibili sul sangue del puledro (vedere sopra). Quando una cavalla ha avuto un puledro NI ed è accoppiata di nuovo allo stesso stallone, c’è una probabilità del 50% che il prossimo puledro sia a rischio di NI (se eredita il tipo di globuli rossi del sire). In questo caso, è sempre più sicuro trattenere il colostro dal puledro., Se la cavalla è accoppiata a un nuovo stallone, digitando sia la cavalla che lo stallone è ideale per determinare se hanno gruppi sanguigni incompatibili. Infatti, una volta che una cavalla ha avuto un puledro con NI, è sempre bene determinare il gruppo sanguigno della cavalla e il probabile antigene incriminato in modo che gli accoppiamenti futuri possano essere gestiti in modo appropriato. L’unico vantaggio di un cross-match ha contro l’approccio specifico titolo anticorpale è che può raccogliere incompatibilità gruppo sanguigno contro antigeni che non sono in un pannello di screening., Tuttavia, vi è un basso rischio che un anticorpo anti-RBC verrà perso perché il siero viene testato contro gli antigeni eritrocitari comuni offensivi e le segnalazioni di altri antigeni associati a NI sono rare. Entrambi i test (cross-match e titoli anticorpali) hanno il potenziale di perdere bassi livelli di anticorpi. Questo è il motivo per cui è essenziale testare la cavalla il più vicino possibile al parto.