potrivirea încrucișată

procedura de potrivire încrucișată determină dacă sângele donator este compatibil (sau incompatibil) cu sângele destinatar. O variantă a acestui test este testul de încrucișare mare-mânz sau mare-armăsar sau testarea incompatibilității.în ceea ce privește transfuziile de sânge, trebuie efectuată o potrivire încrucișată în următoarele situații:

• sunt prezenți anticorpi patogeni naturali la antigeni de grup sanguin străin. Acest lucru se întâmplă la pisică., La această specie, trebuie efectuată o potrivire încrucișată la prima și la fiecare transfuzie, cu excepția cazului în care sunt cunoscute tipurile de sânge atât ale donatorului, cât și ale primitorului. La rasele de pisici la care există un procent scăzut de pisici de tip B (de exemplu, siameze, DSH sau DLH în SUA), transfuzia de sânge de la un donator necompensat sau neetipat poate fi efectuată relativ sigur. Cu toate acestea, există încă o șansă (deși mică) de reacție majoră la transfuzie și această procedură nu este recomandată.
• sensibilizarea unui animal la antigene străine de celule roșii, la o specie fără anticorpi naturali., Aceasta este situația la câine și cal, ducând la producerea de anticorpi Dobândiți. La aceste specii, o potrivire încrucișată nu trebuie efectuată la prima transfuzie pe care animalul o primește (atâta timp cât puteți fi sigur că aceasta este prima transfuzie vreodată), ci trebuie efectuată la transfuzii ulterioare (dacă intervalul dintre prima transfuzie și cea ulterioară este mai mare de 5 zile).,potrivirea încrucișată va detecta incompatibilitățile dintre donator și primitor care nu vor fi evidente la tastarea sângelui (deoarece tastarea sângelui nu este disponibilă pentru fiecare grup sanguin, doar pentru cele majore). În plus, procedura de potrivire încrucișată nu va ridica anticorpi cu titru scăzut și, prin urmare, nu va preveni reacțiile de transfuzie hemolitică de tip întârziat (pentru mai multe informații, vezi reacții adverse).există două tipuri de potriviri încrucișate:
  1. potriviri încrucișate majore: aceasta este cea mai importantă potrivire încrucișată, comparând eritrocitele donatoare cu serul receptor (adică., verificați dacă există anticorpi preformați (dobândiți sau naturali) în serul receptor împotriva eritrocitelor donatoare. Pentru încrucișarea majoră, aveți nevoie de globule roșii de la donator (acesta poate fi sânge integral de la un animal donator sau globule roșii ambalate) în EDTA sau citrat și ser de la primitor (Tub Non-anticoagulant).
  2. Minore cross-match: Aceasta se compară donator de ser de la primitor eritrocite și controale pentru preformate anticorpi la donator ser care ar putea hemolyse destinatar celule roșii., Această potrivire încrucișată este mai puțin importantă, deoarece, de obicei, serul donator este diluat semnificativ după transfuzie și este puțin probabil să producă o reacție semnificativă de transfuzie. Acest tip de potrivire încrucișată ar putea fi important dacă se transfuzează pacienți mici, la care este mai puțin probabil să apară hemodiluția. În procedura de potrivire încrucișată, eritrocitele spălate sunt incubate cu ser. Pentru cai, rumegătoare și camelide, se adaugă o sursă de complement (pentru hemolizarea eritrocitelor), deoarece anticorpii la cai sunt de obicei hemolizine care necesită o sursă de complement pentru acțiunea lor hemolitică.,
  • pentru potrivirea încrucișată majoră: eritrocitele donatoare sunt spălate și incubate cu ser receptor.
  • pentru potrivirea încrucișată minoră: serul donator este incubat cu eritrocite receptoare spălate.amestecul de eritrocite și ser sunt apoi observate vizual pentru hemoliză (în special la cal) și microscopic pentru aglutinare. Orice dovadă de aglutinare sau hemoliză indică o potrivire încrucișată incompatibilă. Există, de asemenea, kituri comerciale disponibile pentru a detecta incompatibilitățile grupurilor de sânge., Multe dintre acestea se bazează pe geluri, la care se adaugă globule roșii donatoare și ser receptor (încrucișare majoră) sau ser donator și globule roșii receptoare (încrucișare minoră). Reacțiile pozitive (încrucișări incompatibile) produc o linie de globule roșii în mijlocul gelului, în timp ce într-o reacție negativă (compatibilă), celulele roșii din sânge se sedimentează pe fundul tubului., Studiile au arătat că aceste rapidă gel pe bază de metode nu sunt la fel de sensibile ca de mai mult timp consumatoare de laborator teste care evaluează pentru aglutinarea microscopic (sau hemolysins vizual pentru unele specii) și rezultatele nu întotdeauna corelează între teste (Guzman et al 2016).când există o reacție puternică incompatibilă la potrivirea încrucișată majoră, sângele donatorului nu trebuie transfuzat în niciun caz. Atunci când există o reacție incompatibilă la meciul încrucișat minor, transfuzia poate continua., Cu toate acestea, dacă serul donat este probabil să contribuie substanțial la volumul plasmatic al recipientului, serul trebuie îndepărtat din sângele integral al donatorului. Celulele ambalate (spălate sau nespălate) trebuie reconstituite în soluție salină izotonică sterilă înainte de perfuzie. Rețineți că, dacă sângele incompatibil cu potrivirea încrucișată este administrat cailor adulți la prima transfuzie, globulele roșii transfuzate vor avea o supraviețuire semnificativ redusă și pot fi observate reacții ușoare non-hemolitice (Tomlinson et al 2015). În consecință, anchetatorii recomandă încrucișarea cailor la prima transfuzie.,mai multe informații sunt disponibile la testarea încrucișată oferită de Centrul de Diagnostic pentru sănătatea animală al Universității Cornell.

    testul de incompatibilitate Mare-mânz sau mare-armăsar

    testul de incompatibilitate mare-mânz sau mare-armăsar este o procedură încrucișată care caută Incompatibilitatea între mare și mânz sau mare și armăsar. În mod specific, testul compară dacă există anticorpi în serul de mare (sau colostru) la eritrocitele mânzului sau armăsarului., Incompatibilitatea mare-mânz este un test pentru confirmarea sau prevenirea izoeritrolizei neonatale.

    izoeritroliza neonatală (NI) este o anemie hemolitică care apare la mânji (care moștenesc antigenele grupului sanguin al sire) născuți din iepe de un tip de sânge diferit de armăsarul cu care au fost împerecheați., Iapa este sensibilizat la grupa de sange antigen de armăsar prin:

    • sarcini anterioare (cea mai frecventă situație)
    • anterior transfuzii de sânge sau plasmă
    • de vaccinare cu produsele care conțin ecvină antigenele eritrocitare

    Sensibilizare apare in timpul sarcinii din cauza unui fenomen numit retroplacental sângerare, în care mânz sângele vine în contact cu mare circulație în ultimele câteva săptămâni de sarcină. Poate apărea în mod natural mai devreme dacă există o patologie placentară., Prin urmare, NI apare de obicei la iepe multipare și numai după ce mânzul a ingerat colostrul. Cele mai frecvente tipuri de sânge la cal care produc NI sunt antigene Aa și Qa, deși NI la alte antigene (inclusiv Pa și Ua) a fost raportat. Când mânzul ingerează colostru care conține anticorpi de la iapă împotriva antigenelor celulelor roșii din sânge ale sire ,mânzul (dacă tipul de sânge al sire a fost moștenit) suferă o anemie hemolitică, care poate fi severă și poate duce la mortalitate neonatală., Cele mai multe semne de NI apar în 24-36 de ore; slăbiciunea, hemoglobinuria și hemoglobinemia pot fi observate în cazuri severe.mai mult, tuturor cailor le lipsește un antigen care este unic pentru celulele roșii din sânge ale măgarului (așa-numitul factor de măgar). Astfel, sarcinile de catâr sunt expuse riscului de inițiere a NI (MacLeay, 2001, Boyle et al., 2005).pentru a determina dacă NI a apărut la un mânz care este deja născut, se poate efectua o potrivire încrucișată pe iapă și mânz. Aceasta necesită depunerea eritrocitelor din mânz (sânge EDTA) și serul separat de mare., La Universitatea Cornell, efectuăm un test de incompatibilitate mare-mânz și căutăm atât aglutinarea (evaluarea microscopică), cât și reacțiile hemolitice (aceasta din urmă prin adăugarea unei surse de complement pentru a Liza celulele roșii din sânge).alternativ, pentru a diagnostica NI într-un mânz, se poate face un test Coombs direct (în căutarea anticorpului sau a complementului legat de globulele roșii ale mânzului) pe sângele mânzului (acest lucru necesită un tub EDTA de la mânz). Cu toate acestea, aceste teste sunt de obicei efectuate de laboratoarele de trimitere, iar rezultatele pot fi disponibile numai după câteva zile.,există un kit disponibil, numit testul de aglutinare a mânzului de icter (JFA), care poate fi efectuat „stallside” (dacă aveți o centrifugă). Acest test evaluează aglutinarea dintre colostrul sau serul de mare și sângele mânzului. Colostrul sau serul este diluat în serie și amestecat cu sânge de mânz în eprubete. Tuburile sunt centrifugate și butonul este observat pentru aglutinare. Dacă este prezentă aglutinarea, butonul nu se dispersează atunci când tubul este flicked., O reacție pozitivă la un titru de > 1:16 indică o incompatibilitate (la titruri mai mici, pot apărea reacții fals pozitive) și indică faptul că colostrul trebuie reținut de mânz. Acesta este un test util pentru a determina dacă o iapă, care a avut anterior un mânz cu NI și a fost împerecheată cu același armăsar care a produs mânzul NI sau un alt armăsar de tip sanguin necunoscut, are anticorpi la mânzul curent., Cu toate acestea, testul nu caută hemoliză și este mai puțin sensibil decât procedura de încrucișare de rutină (care evaluează aglutinarea microscopică și hemoliza)., serum alloantibody bound to foal RBCs Alloantibody from mare colostrum/serum on foal RBCs Samples Foal: venous blood (EDTA) Foal: venous blood (EDTA and non-anticoagulant)
    Mare: venous blood (non-anticoagulant) Foal: venous blood (EDTA)
    Mare: colostrum/serum Procedure Washed foal RBCs are incubated with the equine polyvalent Coombs reagent (anti-IgG, anti-IgM and anti-C antibodies) at 37° C., Pot fi efectuate diluții. RBC-urile de mânz spălate sunt incubate la 37°C cu ser de mare și amestecate cu complement exogen. Se efectuează două diluții (1: 4 și 1: 16).,sult Aglutinare Hemoliza la diluții >1:16
    Aglutinare Aglutinare în diluții 1:16 sau mai mare

    Mare-armăsar incompatibilitate de testare

    Neonatală isoerythrolysis pot fi prevenite prin testarea unui sensibile mare înainte de fătare (mare-armăsar incompatibilitate test) și reținerea colostru pentru 24 de la 48 de ore (de căluș mânz și hrănire o sursă alternativă de colostru)., În mod ideal, iapa ar trebui să fie încrucișată cu armăsarul (celulele roșii din sânge și serul de mare), în special în ultimele 1-3 săptămâni de sarcină, când este probabil să apară expunerea la eritrocitele mânzului (dacă există o incompatibilitate, iapa va avea un răspuns anamnestic la antigen, rezultând un titru ridicat de anticorpi în acest moment). Unii autori recomanda repeta eco-potrivire la fiecare două săptămâni, în ultima lună de sarcină să se uite pentru o creștere a titrului (de multe ori crește de la < 1:4 >1:256 în ultimele patru săptămâni înainte de fătare)., Un titru în creștere indică o probabilitate mare de NI și relevă necesitatea reținerii colostrului de la mânz.alternativ, testul de aglutinare a mânzului de icter poate fi utilizat la parturiție, iar colostrul poate fi reținut. Rețineți că o singură potrivire încrucișată între o iapă și un armăsar nu poate dezvălui o incompatibilitate dacă iapa este testată înainte sau la începutul sarcinii (din cauza titrurilor scăzute de anticorpi care nu pot produce o reacție incompatibilă)., De la mare-armăsar incompatibilitate test necesită celule roșii din sânge de la armăsar (EDTA sânge), care poate fi dificil de a obține, o abordare alternativă pentru a determina dacă iapa este probabil de a dezvolta anticorpi împotriva mânz celule roșii din sânge (cu sire este tipul de sânge), iapa lui ser pot fi analizate în raport cu un panou de RBC antigene pentru prezența de anticorpi, care se face în anumite centre (a se vedea link-uri conexe)., Din nou, acest test trebuie făcut cât mai aproape posibil de foaling, atunci când iapa este probabil să dezvolte un răspuns anamnestic (un răspuns îmbunătățit după re-expunerea la antigenul primar al globulelor roșii) din tipul de globule roșii incompatibile pe sângele mânzului (vezi mai sus). Când o iapă a avut un mânz NI și este împerecheată din nou la același armăsar, există o șansă de 50% ca următorul mânz să fie expus riscului de NI (dacă moștenește tipul de celule roșii din sânge). În acest caz, este întotdeauna mai sigur să rețineți colostrul de la mânz., Dacă iapa este împerecheată cu un nou armăsar, tastarea atât a iapei, cât și a armăsarului este ideală pentru a determina dacă au tipuri de sânge incompatibile. Într-adevăr, odată ce o iapă a avut un mânz cu NI, este întotdeauna bine să se determine tipul de sânge al iapei și antigenul probabil ofensator, astfel încât viitoarele împerecheri să poată fi gestionate în mod corespunzător. Singurul avantaj pe care îl are un meci încrucișat față de abordarea specifică a titrului de anticorpi este că poate ridica incompatibilitățile grupurilor de sânge împotriva antigenilor care nu se află într-un panou de screening., Cu toate acestea, există un risc scăzut ca un anticorp anti-RBC să fie ratat, deoarece serul este testat împotriva antigenelor eritrocitare ofensatoare comune și rapoartele altor antigene asociate cu NI sunt rare. Ambele teste (potrivirea încrucișată și titrurile de anticorpi) au potențialul de a pierde niveluri scăzute de anticorpi. Acesta este motivul pentru care este esențial să testați iapa cât mai aproape de foaling.